我們日常中所使用的載玻片都是為76mmx26mm的大小，厚度大約在2mm以內。可以在一般的光學顯微鏡底下使用。但是如果我們用相差顯微鏡和暗場顯微鏡的時候，那么載玻片的厚度要求就必須要嚴格了，必須要求載玻片厚度必須在1mm左右，在用暗視場的顯微鏡的時候一般的暗視場聚光器上都標有載玻片的厚度，一般在1mm~1.2mm左右。
還有一種特殊的載玻片我們成為凹玻片，就是載玻片中間有一個圓形凹穴，滴上培養液后可以進行細胞的活體觀察，但是同時因為凹面的關系，我們在使用相差顯微鏡的時候透射光會發生歪曲，所以不建議在相差顯微鏡上使用。
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